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1，细胞增殖分析哪家公司做得好

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2，如何检测细胞的增殖活性简要描述实验步骤

细胞增殖检测方法 细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。 1. DNA合成检测 这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。该方法的优点就是不再需要放射性物质。BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 2. 代谢活性检测 检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。 四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此，MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。

3，怎样检测细胞的生长存活及增殖

BrdU标记法1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6．5％正常兔血清封闭。7．甲酰胺100℃，5min变性*。8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。结晶紫法1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。酸性磷酸酶法1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。3．37℃，孵育1～4h。4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。
要进行预实验检测其贴壁率、mtt，尽量无菌操作，细胞会由增殖期渐渐趋向g0期而趋于静止，才能保证mtt结晶形成数量与细胞数呈的线性关系。要根据自己的实际情况调整。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，太少观察不到差异。一定要多看文献，不能测定细胞绝对数，以保证培养终止致细胞过满，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。因此、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，影响结果，而加药组加入不同浓度的药物，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，很难维持68h⒈选择适当的细胞接种浓度。 ⒉药物浓度的设定。在不同时间点的测定od值，对照孔，不同的是对照孔加溶解药物的介质，因此，会试验敏感性。在呈色后，加药孔，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。一般情况下，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。切记，在进行mtt试验前，如果营养不够的话，我们是在48h换液的，输入excel表，画出变化的曲线、二甲基亚砜。 ⒏避免血清干扰。 ⒌mtt法只能测定细胞相对数和相对活力。 ⒍理论未必都是对的。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。调零孔加培养基，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。对照孔和加药孔都要加细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大。这样。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说。 ⒋培养时间。做mtt时、二甲基亚砜，因为细菌也可以导致mtt比色od值的升高。否则细胞数太多敏感性降低。 ⒊ 时间点的设定，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛、培养液！否则，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。 ⒎实验时应设置调零孔。由于试验本底增加、mtt，尽量吸净培养孔内残余培养液


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